蛋白质免疫印迹分析（Western Blot，WB），是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常用的一种实验方法。其基本原理是通过特异性抗体对凝胶电泳处理过的细胞或生物组织样品进行着色，通过分析着色的位置和着色深度获得特定蛋白质在所分析的细胞或组织中表达情况的信息。

基本步骤是通过SDS-PAGE对蛋白质样品进行分离，随后将其转移至固相载体，如NC或PVDF膜。固相载体以非共价键方式吸附蛋白质，同时能够保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性的不变性。在该过程中，固相载体上的蛋白质或多肽被作为抗原，与相应的抗体发生免疫反应，随后与酶或同位素标记的第二抗体发生反应。最终，通过底物显色或放射自显影等手段，实现对电泳分离的特异性目的基因表达的蛋白成分的检测。

SDS：阴离子去污剂、变性剂

Ø  氨基酸侧链与SDS充分结合形成带负电荷的蛋白质-SDS胶束。

Ø  蛋白质-SDS胶束所带的负电荷大大超过了蛋白质分子原有的电荷量，消除了不同分子之间原有的电荷差异。

Ø与强还原剂一起使蛋白分子氢键、疏水键打开，使蛋白质分子线性化。

PAGE：

聚丙烯酰胺凝胶是由单体丙烯酰胺和交联剂N,N’-亚甲基双丙烯酰胺在催化剂和加速剂作用下聚合交联而成的三维网状结构的凝胶。化学惰性强，具有一定的机械强度和透明度，是良好的电泳介质。

SDS-PAGE基本原理：

SDS-PAGE是在蛋白质样品中加入SDS和含有基乙醇的样品处理液，SDS是一种很强的阴离子表面活性剂，可以断开分子内和分子间的氢键，破坏蛋白质分子的二级和三级结构。

强还原剂巯基乙醇(或二硫苏糖醇，DTT)可以断开二硫键破坏蛋白质的四级结构。使蛋白质分子被解聚成肽链形成单链分子。解聚后的侧链与SDS充分结合形成带负电荷的蛋白质-SDS复合物。

蛋白质分子结合SDS阴离子后，所带负电荷的量远远超过了它原有的净电荷，从而消除了不同种蛋白质之间所带净电荷的差异。蛋白质的电泳迁移率主要决定于亚基的相对分子质量，而与其所带电荷的性质无关。

Western Blot应用：

目的蛋白的表达特性分析；

目的蛋白与其它蛋白的相互作用；

目的蛋白的组织定位；

目的蛋白的表达量分析；