免疫组织化学（Immunohistochemistry，IHC），指在组织细胞原位通过抗原抗体反应和呈色反应，借助可见的标记物，对相应的抗原或抗体进行定位、定性和定量检测的一种免疫检测方法。

组织或细胞中凡是能作为抗原或半抗原，如蛋白质、多肽、氨基酸、多糖、磷脂、受体、酶、激素、核酸及病原体等都可用相应的特异性抗体进行检测。

原理：通过免疫学中抗原抗体结合反应，用特异性抗体（单克隆或多克隆）检测组织、细胞内相应的抗原物质，形成抗原-抗体复合物；此复合物上带有事先标记的标记物通过与标记物相对应的检测系统，如酶底物显色反应可使之呈现某种颜色，从而可检测组织细胞内的抗原，以达到诊断、鉴别诊断和研究的目的。

图1 免疫组化原理图

IHC 检测可分为直接法(又称一步法)和间接法(二步、三步或多步法)。直接检测方法是直接与偶联物 (例如荧光染料、酶、胶体金或生物素) 结合标记的一抗的一步过程。直接法快速，但对于检测常规处理的组织中的大多数抗原缺乏足够的灵敏度。

间接法的灵敏度高于直接法：未标记的一抗保留了完全的亲和力，具有更强的抗原结合力，并且每分子一抗的标记物（例如过氧化物酶）数量更多，从而增加了反应强度。

间接法可以用较少的一抗检测较少量的抗原，用于放大一抗信号，因为一个一抗至少可以结合两个带标记的二抗。

二抗的选择，取决于一抗的种属来源、反应物种、类别亚型、二抗形式、偶联标记形式。

免疫组化通常采用F(ab') 形式的片段酶标（HRP/AP）/生物素标记二抗。

在研究某些细胞（如巨噬细胞、B细胞、自然杀伤细胞等）和组织（如淋巴结，脾脏，外周血等）时，这些细胞或组织因表面Fc端受体过多，会与抗体分子中的Fc端相结合，从而导致非特异性结合和高背景的现象，俗称“假阳性”。

使用F(ab') 形式的二抗可以避免其与活细胞中的Fc受体非特异性结合，还可避免与Protein A、ProteinG的非特异性结合，从而提高实验准确性。