酶联免疫吸附ELISA

酶联免疫吸附试验Enzyme Linked Immunosorbent AssayELISA)是酶免疫测定技术中应用最广的技术。其基本方法是将已知的抗原或抗体吸附在固相载体 ( 聚苯乙烯微量反应板 ) 表面,使酶标记的抗原抗体反应在固相表面进行,用洗涤法将液相中的游离成分洗除。

使用酶去标记抗原或抗体以后,既不影响抗原抗体反应的特异性,也不改变酶本身的活性。因此ELSA具有准确性高、检测时间短、价格低廉、判断结果有客观标准、结果便于记录和保存等优点,适合于大批标本的检测,广泛应用于食品安全检测、医疗检测以及免疫实验分析等领域。

实验原理

抗原或抗体能以物理性地吸附于固相载体表面,并保持器免疫学活性。例如:蛋白质分子结构上的疏水基团与聚苯乙烯表面的疏水基团能产生互作用而吸附。

抗原或抗体可通过共价键与酶连接形成酶结合物,而此种酶结合物仍能保持其免疫学和酶学活性

酶结合物与相应抗原或抗体结合后,可根据加入底物的颜色反应来判定是否有免疫反应的存在,而且颜色反应的深浅是与标本中相应抗原或抗体的量成正比例的,由此进行定性或定量分析。

实验应用:

Ø  免疫酶染色各种细胞内成分的定位

Ø  显现微量的免疫沉淀反应

Ø  研究抗酶抗体的合成

Ø  定量检测体液中抗原/抗体成分

实验目的:

Ø  检测生物样品中抗体、抗原、蛋白质和糖蛋白等物质的含量。

Ø  药物药效学评价、筛选。

 

根据试剂的来源和标本的情况以及检测的具体条件,可设计出各种不同类型的检测方法,主要类型有双抗体夹心法、间接法、竞争法、捕获法等。